動物の培養細胞の保存は、細胞を剥離し保存液に懸濁して凍結保存する方法が一般的ですが、操作が煩雑なこと、解凍時の生存率にばらつきがあること、細胞表面がトリプシンなどの剥離剤処理で傷害を受けること、高価な血清培地が多量にいることなどの問題があります。 　本発明は、保存する培養細胞を特定のメッシュ状繊維担体（10 〜 120μm の開口部、繊維直径1〜80μm）上で接着培養することにより、これらの問題を解決しました。本来、正常な培養細胞は培養シャーレ上に一様に広がると増殖を止めます。しかしメッシュ状繊維担体に接着した培養細胞は、増殖すると自らの細胞でメッシュの孔を埋めていき、メッシュ孔の両面から培養液があたります。こうしてできる細胞塊は、非常に高密度かつ生体組織と同様の構造となることから、保存中の細胞への物理ストレスが抑えられます。
　また、メッシュ状繊維担体に接着した培養細胞は担体ごと容易に取り扱え、保存液は担体が浸るだけの量に削減でき、解凍に必要な時間も短く細胞へのストレス低減につながります。そして細胞をメッシュから剥離する際にはトリプシンを使わず、軽く振動をあたえるだけで剥離できます。

写真●メッシュと孔に接着・増殖した細胞

　本法により、従来法と比べて簡便かつ高い生存率を示す凍結保存が可能となります。また、保存液を全く使わずに、気相での凍結保存も生存率は低くなりますが可能であることも確認しています。

表●本発明と従来法の比較

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JAMSTEC イノベーションニュース 技術レポート
vol.4（Feb.2013）
担体を使った動物細胞の凍結保存法
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